活性氧（ROS）在细胞生理和病理过程中扮演关键角色，李记生物的活性氧检测试剂盒提供了一种基于荧光染料DCFH-DA的检测方法，能够定量检测细胞内ROS水平。DCFH-DA在细胞内酯酶作用下生成DCFH，后者不易穿过细胞膜，从而标记细胞内ROS。在ROS存在下，DCFH被氧化为荧光物质DCF，其荧光强度与细胞内ROS水平呈正比。
李记生物的活性氧检测试剂盒（Meilun Reactive Oxygen Species Assay Kit）采用DCFH-DA作为荧光染料，通过检测荧光强度变化，量化细胞内ROS水平。DCFH-DA可自由穿过细胞膜，进入细胞后，被酯酶水解生成DCFH。在ROS存在下，DCFH被氧化为绿色荧光DCF，荧光强度与细胞内ROS水平正相关。
DHE探针法是一种通过荧光强度变化来定量检测细胞内活性氧水平的有效手段。活性氧，包括超氧阴离子、氢过氧基等多种化合物，与生物体内的氧化损伤密切相关。细胞内活性氧的产生可能导致细胞组分损伤，因此监测其水平至关重要。DCFH-DA探针作为荧光探针，其本身无荧光，能穿透细胞膜。
活性氧（reactive oxygen species，ROS）指来源于氧的自由基和非自由基，包含了超氧阴离子（O2-）、过氧化氢（H2O2）、羟基自由基（OH）、臭氧（O3）和单线态氧（1O2）等，由于它们含有不成对的电子，因而具有很高的化学反应活性。
在病理条件下，由于活性氧的产生和清除失去了正常平衡，会对组织细胞造成损伤。二氢乙锭（Dihydroethidium， DHE），可自由透过活细胞进入细胞内，并被细胞内的ROS氧化，形成氧化乙锭；氧化乙锭可掺入染色体DNA中，产生红色荧光。根据活细胞中红色荧光的产生，可以判断细胞ROS含量的多少和变化。
检测ROS的方法多种多样，包括电子顺磁共振技术（EPR）用于直接检测特定自由基，荧光染色法如DHE、DCFH-DA和Amplex Red用于测量氧化状态，化学发光法检测超氧化物，色谱法用于羟基自由基检测，以及分光光度法和电化学生物传感器。还有基于荧光蛋白的方法，可以实时监测细胞内的氧化还原状态。
这说明PDT抗细菌治疗原理可能是利用光敏剂选择性地潴留于细菌，主要位于细菌细胞壁和细胞膜上，激光照射时便产生单态氧和其它活性氧（ROS）直接损伤细菌细胞壁及膜系统，影响其新陈代谢，导致细菌死亡。
1、活性氧检测试剂盒是一种利用荧光探针DCFH-DA检测活性氧的试剂盒。DCFH-DA本身无荧光，能自由穿透细胞膜，进入细胞后被酯酶分解成DCFH。DCFH不能穿透细胞膜，因此很容易进入细胞。细胞内的活性氧氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF，荧光强度可反映细胞内活性氧水平。
2、活性氧（ROS）的流式检测通常采用荧光探针DCFH-DA，其原理在于DCFH-DA进入细胞后被酯酶水解为DCFH，随后在细胞内ROS作用下氧化生成发荧光的DCF，荧光强度与ROS水平正相关。通过荧光显微镜、流式细胞仪或激光共聚焦显微镜检测，激发波长为480nm，发射波长为525nm。
3、步骤一：选择荧光探针 常用的荧光探针DCFH-DA能够通过细胞膜进入细胞。在细胞内，酯酶作用下DCFH-DA水解为DCFH。活性氧分子氧化DCFH生成荧光物质DCF，荧光强度与ROS水平成正比。步骤二：装载探针 对于短暂刺激的细胞，首先装载DCFH-DA，随后给予活性氧阳性对照或感兴趣药物。
ROS 的检测方法主要有荧光染色法、电子顺磁（自旋）共振技术（EPR/ESR）、化学发光法、色谱法、分光光度法、电化学生物传感器和基于荧光蛋白等。
目前，针对ROS的检测方法包括荧光染色法、电子顺磁共振技术（EPR）、化学发光法、色谱法、分光光度法、电化学生物传感器和基于荧光蛋白等7种，其中荧光染色法是最常用的方法之一。荧光染色法最常用的是DCFH-DA荧光探针法。
装载探针时，要确保细胞在50%~70%的密度，以便探针均匀分布。洗涤细胞以清除未进入的探针，同时，测定时间应尽可能短以减小误差。装载后，通过荧光检测仪器确认探针的分布和活性氧的信号强度。在实验过程中，注意探针残留和激发波长/发射波长的校准，以确保结果的准确性和可重复性。
流式检测的步骤包括选择荧光探针、装载DCFH-DA、刺激细胞（短期或长期）、收集细胞并装载探针，然后使用流式细胞仪或激光共聚焦显微镜检测荧光信号。在装载探针时，对于短期刺激的细胞，先装载DCFH-DA，接着进行活性氧刺激；对于长期刺激的细胞，则先刺激，后装载探针。
步骤一：选择荧光探针 常用的荧光探针DCFH-DA能够通过细胞膜进入细胞。在细胞内，酯酶作用下DCFH-DA水解为DCFH。活性氧分子氧化DCFH生成荧光物质DCF，荧光强度与ROS水平成正比。步骤二：装载探针 对于短暂刺激的细胞，首先装载DCFH-DA，随后给予活性氧阳性对照或感兴趣药物。
